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        人胰島素定量ELISA檢測試劑盒產品介紹

        提供者:泉州市睿信生物科技有限公司   發布時間:2018/9/4  閱讀次數:111次   進入該公司展臺

        【產品名稱】

        通用名稱:人胰島素定量ELISA檢測試劑盒

        【包裝規格】96人份/盒

        【預期用途】僅供科研使用,定量檢測血清、血漿、細胞培養上清液中PRLR的濃度。

        【檢驗原理】本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附檢測技術。特異性抗人/犬/豬Insulin 單克隆抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本和生物素化的檢測抗體,經過孵育,樣本中存在的Insulin 與固相抗體和檢測抗體結合。洗滌去除未結合的物質后,加入辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素(streptavidin-HRP)。洗滌后,加入顯色底物TMB,避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中Insulin 的濃度成正比。加入終止液終止反應,在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。【主要組成成分】

        主要成分

        組分

        規格

        數量

        包被微孔板

        96T

        1

        標準品

        500pg/mL

        2

        抗體

        80uL

        1

        辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素

        150uL

        1

        10×檢測緩沖液

        5mL

        1

        標準品稀釋液

        5mL

        1

        TMB顯色液

        10mL

        1

        TMB終止液

        10mL

        1

        洗滌緩沖液(20X)

        30ml

        1

        封板膜

         

        4

        注意:使用前請檢查試劑盒中試劑的標簽和數量與表格是否一致

        【樣本要求】

          樣本類型和采集

        細胞培養上清 :300 g 離心 10 分鐘去除沉淀物,即刻檢測, 或者分裝,-20℃以下貯存。

        血清樣本:分離管分離血清。在 1000 g 離心之前,使血樣凝集 30 分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測,或 者分裝,-20℃以下貯存。

        血漿樣本:EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝收集血漿樣本。1000 g 離心 3 0 分鐘收集樣本。即刻檢測,或者 分裝,-20℃以下貯存。 本試劑盒可能適用于其它生物學樣本。細胞培養上清、血清和血漿已經過驗證。

        注意:檢測前,樣本中可見的沉淀必須去除。不要使用嚴重溶血或高血脂的樣本。 樣本應分裝并貯存于-20,以避免人IL-6活性的丟失。如果在 24 小時內檢測,樣本可以 存放在 2 - 8 避免樣本的反復凍融。在檢測前,冷凍樣本應該緩慢地恢復至室溫,輕柔地混勻。

        樣本保存和穩定性

        樣本在2-8℃條件下,可以儲存72h,或者在- 20℃儲存6個月。樣本收集后,不是一次檢測完,請按一次用量分裝凍存,避免反復凍融,使用時在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。

        【檢驗方法】

        試劑準備

        檢測前請將所有的試劑、樣本恢復至室溫。 如果濃縮的試劑出現結晶,37℃溫浴,直至結晶全部溶解。

        洗液

        吸取 20×濃縮洗液 30 ml 至 1 L 的量筒,加蒸餾水或去離子水至600 ml,輕輕混勻,避免泡 沫。 轉移至干凈瓶內。2 - 25℃貯存,1×洗液可穩定 30 天。

        檢測緩沖液

        吸取 10×濃縮檢測緩沖液 5 ml 至 100 ml 量筒,加蒸餾水或去離子水至 50 ml,輕輕混勻,避 免泡沫。 2 - 8℃貯存,1×檢測緩沖液可穩定保存 30 天。

        檢測抗體 

        稀釋前充分混勻。根據標準品和待測樣本的數量,用 1×檢測緩沖液按 1:100 稀釋濃縮的檢 測抗體。 注意:請在 30 分鐘內使用稀釋后的檢測抗體。

        辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素

        稀釋前充分混勻。 根據標準品和待測樣本的數量,用 1×檢測緩沖液按 1:100 稀釋濃縮的辣根過氧化物酶標記的 鏈霉親和素。 注意:請在 30 分鐘內使用稀釋后的辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素。

        樣本稀釋

        如果樣本需要稀釋,請用試劑盒提供的 1×檢測緩沖液稀釋血清/血漿樣本,用細胞培養基稀釋 細胞培養上清。

        人胰島素標準品

        用蒸餾水或去離子水重溶人胰島素標準品,重溶體積標注在人胰島素標準品的標簽上。輕柔 地渦旋震蕩,確保充分混勻,重溶后標準品的濃度為4000 pg/ml。重溶后靜置 10 - 30 分鐘。稀釋 前充分混勻。 請使用聚丙烯管進行標準品稀釋。

        標準曲線制作血清/血漿樣本標準曲線的制作:

        取 250 μl 濃縮的人胰島素標準品,加入 250 μl 標準品稀釋液,作為標準曲線的最高濃度 (2000 pg/ml)。在每一個試管中加入 250 μl 標準品稀釋液。使用高濃度標準品做 1:1 系列稀釋。每次移 液時,請確保充分混勻。以標準品稀釋液作為標準曲線的零濃度。

        細胞培養上清樣本標準曲線的制作:

        取 250 μl 濃縮的人胰島素標準品,加入 250 μl 細胞培養基,作為標準曲線的最高濃度 (2000 pg/ml)。在每一個試管中加入 250 μl 細胞培養基。使用高濃度標準品做 1:1 系列稀釋。每次移液 時,確保充分混勻。以細胞培養基作為標準曲線的零

        【檢測步驟】

        檢測之前請將所有的試劑、樣本平衡至室溫。

        1. 準備好所有需要的試劑及工作濃度標準品。

        2. 將不需要的板條拆卸下來,放回裝有干燥劑的鋁箔袋,重新封好封口。

        3. 加入300 μl 1×洗液靜置浸泡30 秒。為了獲得理想的實驗結果浸泡是必須的。棄掉洗液之后,在吸水紙上將微孔板拍干。洗板完成之后,請立即使用微孔板,不要讓微孔板干燥。

        4. 復孔加入100 μl 2 倍倍比稀釋的標準品。空白孔復孔加入100 μl 標準品稀釋液。

        5. 樣本孔加入50 μl 1×檢測緩沖液和50 μl 樣本。

        6. 每孔加入50 μl 稀釋的檢測抗體。保證步驟4、5、6 連續加樣,不要間斷。加樣過程在15 分鐘內完成。

        7. 使用封板膜封板。300 轉/分鐘振蕩,室溫孵育1.5 小時。

        8. 棄掉液體,每孔加入300 μl 洗液洗板,洗滌6 次。每次洗板,在吸水紙上拍干。為獲得理想的實驗性能,必須徹底移除殘留液體。

        9. 每孔加入100 μl 稀釋的辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素。

        10. 使用新的封板膜封板。300 轉/分鐘振蕩,室溫孵育30 分鐘。

        11. 重復步驟8。

        12. 每孔加入100 μl 顯色底物TMB,避光,室溫孵育5 - 30 分鐘。

        13. 每孔加入100 μl 終止液。顏色由藍色變為黃色。如果顏色呈現綠色或者顏色的變化明顯不均勻,請輕輕叩擊板框,充分混勻。

        14. 在30 分鐘之內,使用酶標儀進行雙波長檢測,測定450 nm 最大吸收波長和570 nm 或630 nm參考波長下的OD 值。校準后的OD 值為450 nm 的測定值減去570 nm 或630nm 的測定值。僅使用450 nm 測定會導致OD 值偏高,并且準確度降低。

        【結果計算】

        計算標準品和樣本的平均OD 值,然后減去零濃度標準品的OD 值。以標準品濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,用計算機軟件進行回歸擬合生成標準曲線。回歸分析確定最佳擬合曲線。通過對濃度值和OD 值取對數擬合,可以對標準曲線進行線性化。此過程可能可以得到更多樣本的濃度,但數據的準確度會降低一些。

        注意:標準曲線最高濃度點的終濃度為500 pmol/ml。如果完全按照說明書的步驟作 (50 μl

        樣本 + 50 μl 檢測緩沖液),計算樣本濃度時請乘以稀釋因子2。如果樣本按照說明書進行了稀釋,最終的稀釋倍數為2。如果樣本進行了其它方式的稀釋,計算樣本濃度時請乘以相應的稀釋倍數。

        【檢驗方法的局限性】

        1、僅供科研使用,不得用于臨床診斷。

        2、在試劑盒標示的有效期內使用,過期產品不得使用。

        3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。

        4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。

        5、如果樣本值高于最高標準品濃度值,請將樣本適當稀釋后,再重新測定。

        6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結果,檢測前,請排除該因素。

        7、通過其他方法得到的檢測結果,與本試劑盒測定結果不具有直接的可比性。

        【產品性能指標】

        1、物理性能

        試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝,無破損漏氣。

        2、劑量反應曲線線性

        校準品劑量反應曲線相關系數r值,大于等于0.9900。

        3、精密度

        批內精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進行二十次在同一個板塊內精度評估。批內變異系數CV%小于10%。

        批間精密度:三組已知的高、中、低濃度樣品,進行二十次在不同板塊內精度評估。批間變異系數CV%小于15%。

        4、檢測范圍

        7.81pg/ml→500pg/ml

        5、靈敏度

        最低檢出劑量小于0.35pg/mL。

        6、回收率

        三組已知的高、中、低濃度樣品,進行五次回收率評估,回收率在85%-115%之間。

        7、特異性

        本試劑盒識別天然和重組人胰島素,與結構類似物無交叉。

        8、穩定性

        2℃-8℃保存,有效期6個月。

        關鍵詞:胰島素檢測  

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