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        上海大学通过阿仪网成功订购恒远绵羊IgGELISA试剂盒

        2018/9/20提供者: 上海恒远生物技术发展有限公司 人气指数:1540 进入该公司展台

            近日,我公司收到一条上海大学的留言,毛老师向我司钱经理咨询订购新产品IgG,绵羊免疫球蛋白Gelisa试剂盒。凡在本年度9月30日之前购买我司产品,?#19978;?#21463;5折优惠了!我公司还推出了牛奶杯、棉拖鞋等礼品赠送给您哦!

        上海大学通过阿仪网成功订购恒远绵羊IgGELISA试剂盒图如下:

        实验原理
        试剂盒采用双抗体一步?#34892;?#27861;酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被绵羊免疫球蛋白G(IgG)捕获抗体的包被微孔中,?#26469;?#21152;入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的绵羊免疫球蛋白G(IgG)?#25910;?#30456;关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

        样本处理及要求

        1. 血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过?#36141;?#20110;1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
        2. 血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
        3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血?#28023;?#21248;浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要?#23454;?#35843;整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分?#24515;ァ?#20026;了进一步裂解组织细胞,可?#36828;?#21248;浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
        4. 细胞培养物上清或其它生物标本:1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
        注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进?#20889;?#39033;检测。

        标本处理

        1. 本公司?#27426;?#35797;剂盒本身负责,?#27426;?#22240;使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。
        2. 实验前应预测标本含量,如果标本浓度过高,应?#21592;?#26412;进行稀释,使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。标本使用0.01mol/L的PBS稀释(PH=7.0-7.2)。
        3. 若所检样本不包含在说明书所列样本之中,建议进行预实验验证其?#34892;?#24615;,并注意留存样本。
        4. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
        5. 若样本为细胞培养上清,因该类样本干扰因素较多,如:细胞状态、细胞数量、采样时间等,所以可能存在检测不出的情况。
        6. 某些天然蛋白或重组蛋白,包括原核及真核重组蛋白,可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体?#40644;?#37197;,而不被检测出。
        7. 建议使用新鲜样本,保存时间过长可能会存在蛋白?#21040;?#25110;变性导致实验结果偏差。
              
        注意事项

        1.严格按?#23637;?#23450;的时间和温度进行温育?#21592;?#35777;准?#26041;?#26524;。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
        2.洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
        3.消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
        4.底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
        5.避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
        6.在储存和温育时避免?#25239;?#30452;接照射。
        7.平衡至室温后再打开密封袋以防水?#25991;?#32858;在冷板条上。
        8.任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
        9.不能使用过期产品。
        10.如果可能传播疾病,所有的样品?#21152;?#31649;理好,按?#23637;?#23450;的程序处理样品?#22270;?#27979;装置。

        试剂准备

        试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
        20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

        操作步骤

        1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
        2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
        3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
        4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
        5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤?#28023;?50μL),静置1min,甩去洗涤?#28023;?#21560;水纸上拍干,如此重复洗板5次(?#37096;?#29992;洗板机洗板)。
        6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
        7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

        实验结果计算

        以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。

        试剂盒性能

        1. 检测范围:25 μg/mL – 800 μg/mL。
        2. 灵敏度:最?#22270;?#27979;浓度小于1.0 μg/mL。
        3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
        4. 重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。

        说明

        1. 由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析,本产品可能存在?#27426;?#30340;质量技术风险。
        2. 最终的实验结果与试剂的?#34892;?#24615;、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关,请务必准备充足的标本备份。
        3. 不同批次的同一产品可能会有少许差别,如:检测限、灵敏度以及显色时间等,请依据试剂盒内说明书进行实验操作,网站电子版说明书仅作参考。
        4. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果,不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到最佳的检测结果。

            上海恒远生物技术发展有限公司自成立以来一直专注于科研,所供应产品以价格?#25163;小?#21457;货快、品质优等优势,获得众多科?#20449;?#21451;的青睐和支持,为了更好的回馈顾客,?#20013;?#20026;科研单位提供更优质更放心的科研产品,助力您的科学研究,本公司坚持放眼未来,继续开创生物领域产品,欢迎您来电洽谈业务!
                

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